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              糖酵解系列_3-磷酸甘油酸激酶PGK測試盒

              • 更新時間:  2022-07-26
              • 產品型號:  100管/96樣
              • 簡單描述
              • 糖酵解系列_3-磷酸甘油酸激酶PGK測試盒由上海紀寧生物公司提供,包括PGK檢測試劑盒說明書,免費代測,規格,包裝,品牌等關于有關本司測試盒所有產品的詳細介紹
              詳細介紹

              糖酵解系列_3-磷酸甘油酸激酶PGK測試盒

              測定方法:微量法

              產品規格:100管/96樣

              注 意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

              測定意義:

              3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關鍵酶,廣泛存在于動植物和微生物體內,催化 1,3-二磷酸甘油酸轉變為 3-磷酸甘油酸,產生 1 分子 ATP,具有影響 DNA 復制和修補及刺激病毒 RNA 合成等生物學功能,廣泛應用于藥物靶標設計。

              糖酵解系列_3-磷酸甘油酸激酶PGK測試盒

              測定原理:

              3-磷酸甘油酸激酶催化 3-磷酸甘油酸和 ATP 產生 1,3-二磷酸甘油酸和 ADP,1,3-二磷酸甘油酸在 3-磷酸甘油醛脫氫酶和 NADH 作用下產生 3-磷酸甘油醛、NAD 和磷酸,340nm 處的吸光度變化反映了 3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

              自備實驗用品及儀器:

              天平、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板。

              試劑組成和配制:

              提取液:液體 100mL×2 瓶,4℃保存。

              試劑一:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

              試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

              試劑三:粉劑×1 支,-20℃避光保存。臨用前加 1mL 蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

              試劑四:粉劑×1 支,-20℃避光保存。臨用前加 1 mL 蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

              試劑五:粉劑×1 瓶,-20℃避光保存。臨用前加 4 mL 蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

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              酶液提?。?/p>

              ①總 PGK 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時間 1min),然后 4℃,500g 離心 5min,取上清測定。②胞漿和葉綠體 PGK 酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液),冰浴勻漿后于 4℃,500g 離心 5min,棄沉淀,取上清在 4℃,8000g 離心 10min,取上清用于測定胞漿 PGK 酶活性,取沉淀加 1mL 提取液,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時間 1min),然后 4℃, 500g 離心 5min,取上清測定葉綠體中 PGK 酶活性。

              建議測定總 PGK 酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的 PGK,則按照步驟②提取粗酶液。

              測定操作:

              1.分光光度計/酶標儀預熱 30min,調節波長至 340nm,蒸餾水調零。

              2.取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 100μL 試劑一,20μL 試劑二,10μL 試劑三,10μL試劑四,40μL 試劑五,20μL 粗酶液,充分混勻,記錄 340nm 處 10s 的吸光值 A1 和 310s的吸光值 A2,△A=A1-A2



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